實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被胰島素(INS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顔色的深淺和樣品中的胰島素(INS)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中胰島素(INS)的含量;2.試劑盒保存:2-8℃;3.有效期:6個月。雞胰島素(INS)ELISA試劑盒标本的采集及保存1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 (注:标本溶血會影響**檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。) 雞胰島素(INS)ELISA試劑盒 标本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。 生物素标記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 雞胰島素(INS)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。 2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。雞胰島素(INS)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 雞胰島素(INS)ELISA試劑盒洗闆方法手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。5.如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項:收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類标本需添加抑肽酶。計算:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞胰島素(INS)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞胰島素(INS)ELISA試劑盒
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顔色的深淺和樣品中的體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中食欲素A/阿立新A(OXA)的含量;2.試劑盒保存:2-8℃;3.有效期:6個月。雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒标本的采集及保存1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 (注:标本溶血會影響**檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。) 雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒 标本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。 生物素标記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。 2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒洗闆方法手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。5.如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項:收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類标本需添加抑肽酶。計算:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞體腺苷酸環化酶激活肽27(PACAP-27)ELISA試劑盒
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顔色的深淺和樣品中的垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)的含量;2.試劑盒保存:2-8℃;3.有效期:6個月。雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒标本的采集及保存1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 (注:标本溶血會影響**檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。) 雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒 标本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。 生物素标記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。 2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒洗闆方法手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。5.如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項:收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類标本需添加抑肽酶。計算:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞垂體腺苷酸環化酶激活肽38(PACAP-38)ELISA試劑盒
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被早老素1(PS1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顔色的深淺和樣品中的早老素1(PS1)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中早老素1(PS1)的含量;2.試劑盒保存:2-8℃;3.有效期:6個月。雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒标本的采集及保存1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 (注:标本溶血會影響**檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。) 雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒 标本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。 生物素标記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。 2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒洗闆方法手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。5.如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項:收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類标本需添加抑肽酶。計算:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞早老素1(PS1)ELISA試劑盒
實驗原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被胸腺肽α1(Ta1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入标本、标準品、HRP标記的檢測抗體,經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顔色的深淺和樣品中的胸腺肽α1(Ta1)呈正相關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。保存條件及有效期1.本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中胸腺肽α1(Ta1)的含量;2.試劑盒保存:2-8℃;3.有效期:6個月。雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒标本的采集及保存1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 (注:标本溶血會影響**檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。) 雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒 标本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。 生物素标記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。 2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒注意事項1.用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3.爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4.未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5.建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒洗闆方法手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。5.如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請乘以稀釋倍數。6.在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。 8.不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 注意事項:收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。部分激素類标本需添加抑肽酶。計算:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞胸腺肽α1(Ta1)ELISA試劑盒2550
雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒一、标本的采集及保存 1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 注:标本溶血會影響檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒二、标本的稀釋原則 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 1.标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。2.生物素标記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。3.辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒三、操作步驟1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。 5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒四、試劑盒使用小技巧1. 用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 洗闆方法 手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒五、技術小提示1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做标準曲線,**做複孔。 5. 如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒六、注意事項1.收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。2.标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。3.部分激素類标本需添加抑肽酶。 4.計算方法:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒七、試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒八、保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月雞抗環胍氨酸肽抗體(ACCPA) ELISA 試劑盒
雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 一、标本的采集及保存 1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 注:标本溶血會影響檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 二、标本的稀釋原則 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 1.标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。2.生物素标記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。3.辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 三、操作步驟1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。 5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 四、試劑盒使用小技巧1. 用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 洗闆方法 手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 五、技術小提示1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做标準曲線,**做複孔。 5. 如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 六、注意事項1.收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。2.标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。3.部分激素類标本需添加抑肽酶。 4.計算方法:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 七、試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒 八、保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月雞膀胱腫瘤抗原(BTA) ELISA 試劑盒
雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒一、标本的采集及保存 1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 注:标本溶血會影響檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒 二、标本的稀釋原則 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 1.标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。2.生物素标記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。3.辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒三、操作步驟1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。 5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒四、試劑盒使用小技巧1. 用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 洗闆方法 手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒五、技術小提示1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做标準曲線,**做複孔。 5. 如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒 六、注意事項1.收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。2.标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。3.部分激素類标本需添加抑肽酶。 4.計算方法:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒 七、試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒八、保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月雞τ-蛋白激酶1(τPK1) ELISA 試劑盒
雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒一、标本的采集及保存 1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 注:标本溶血會影響檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒 二、标本的稀釋原則 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 1.标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。2.生物素标記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。3.辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒三、操作步驟1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。 5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒四、試劑盒使用小技巧1. 用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 洗闆方法 手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒五、技術小提示1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做标準曲線,**做複孔。 5. 如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒六、注意事項1.收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。2.标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。3.部分激素類标本需添加抑肽酶。 4.計算方法:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒 七、試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒八、保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月雞NOD樣受體(NLR) ELISA 試劑盒
雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒一、标本的采集及保存 1.血清:全血标本請于室溫放置2小時或4℃過一晚後于1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 2.血漿:可用EDTA或肝素作爲抗凝劑,标本采集後30分鍾内于2 - 8° C 1000 x g離心15分鍾,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 3.細胞培養物上清或其它生物标本:1000 x g離心20分鍾,取上清即可檢測,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。 注:标本溶血會影響檢測結果,因此溶血标本不宜進行此項檢測。雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒 二、标本的稀釋原則 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大緻含量,确定适當的稀釋倍數。隻有稀釋至标準曲線的範圍内,檢測的結果才是準确的。稀釋的過程中,應做好詳細的記錄。計算濃度時,稀釋了“N”倍,标本的濃度應再乘以“N”。 1.标準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好後靜置10分鍾以上,然後反複颠倒/搓動以助溶解,其濃度爲300 pg/ml,做系列倍比稀釋後,分别稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作爲标準濃度0 pg/ml,臨用前15分鍾内配制。 如配制150 pg/ml标準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述标準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其餘濃度以此類推。2.生物素标記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素标記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标記抗體加990μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。3.辣根過氧化物酶标記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶标記親和素加990μl辣根過氧化物酶标記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制。 操作步驟 實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做标準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒三、操作步驟1.加樣:分别設空白孔、标準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分别加标準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣将樣品加于酶标闆孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶标闆加上蓋或覆膜,37℃反應120分鍾。 爲保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的标準品溶液。2.棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素标記抗體工作液 100μl(取1μl生物素标記抗體加99μl生物素标記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時内配制),37℃,60分鍾。 3.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆3次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 4.每孔加辣根過氧化物酶标記親和素工作液(同生物素标記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鍾。 5.溫育60分鍾後,棄去孔内液體,甩幹,洗闆5次,每次浸泡1-2分鍾,350μl/每孔,甩幹。 6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鍾内,此時肉眼可見标準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。 7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。爲了保證實驗結果的準确性,底物反應時間到後應盡快加入終止液。 8.用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鍾以内進行檢測。 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒四、試劑盒使用小技巧1. 用戶在初次使用試劑盒時,應将各種試劑管離心數分鍾,以便試劑集中到管底。2. 每次實驗留一孔作爲空白調零孔,該孔不加任何試劑,隻是**加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 3. 爲防止樣品蒸發,試驗時将反應闆放于鋪有濕布的密閉盒内,酶标闆加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶标闆或者試劑,請于2-8℃保存。标準品、生物素标記抗體工作液、辣根過氧化物酶标記親和素工作液請依據所需的量配置使用。請勿重複使用已稀釋過的标準品、生物素标記抗體工作液或、辣根過氧化物酶标記親和素工作液。 5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準确性。 洗闆方法 手工洗闆方法:吸去(不可觸及闆壁)或甩掉酶标闆内的液體;在實驗台上鋪墊幾層吸水紙,酶标闆朝下用力拍幾次;将推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分鍾。根據需要,重複此過程數次。 自動洗闆:如果有自動洗闆機,應在熟練使用後再用到正式實驗過程中。 計算 以标準物的濃度爲橫坐标(對數坐标),OD值爲縱坐标(普通坐标),在半對數坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒五、技術小提示1.當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間**控制在5分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做标準曲線,**做複孔。 5. 如标本中待測物質含量過高,請先稀釋後再測定,計算時請**乘以稀釋倍數。 6. 在配制标準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生産廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒六、注意事項1.收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集後當天進行檢測的标本,儲存在4 ℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本, 将标本及時分裝後放在-20 ℃或-70 ℃條件下保存。避免反複凍融。2.标本2 -8 ℃可保存48 小時,-20 ℃可保存1 個月。-70度可保存6 個月。3.部分激素類标本需添加抑肽酶。 4.計算方法:以标準物的濃度爲橫坐标,OD值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即爲樣品的實際濃度。 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒 七、試劑盒性能1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.92以上。2.批内與批見應分别小于9%和15% 雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒八、保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。 2.有效期:6個月雞雌激素受體α(ERα) ELISA 試劑盒