脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。脫氫抗壞血酸還原酶（DHAR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

抗壞血酸氧化酶（AAO）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。抗壞血酸氧化酶（AAO）測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

L-半乳糖酸-1,4-内酯脫氫酶(Gal LDH)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。L-半乳糖酸-1,4-内酯脫氫酶(Gal LDH)測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

還原型抗壞血酸（AsA）/維生素C含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。還原型抗壞血酸（AsA）/維生素C含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot

氧化型/脫氫抗壞血酸（DHA）含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?  生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本無溶血、脂血、的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。求3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。微量法和分光光度法的區别?分光光度法:主流測定體系爲1mL,測試儀器分光光度計,能夠大限度地滿足絕大多數用戶的需要。微量法:主流測定體系爲0.2mL,測試儀器或分光光度計,測定更加簡便快捷。試劑盒規格中是100管和50管是什麽意思?(1)50管/48樣:50管指能夠做50次測定,48樣指可以測試48個樣品。如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者對照管。值得特别注意的是,50管/24樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲8個(假設做3次重複)(2)100管/96樣:100管指能夠做100次測定,96樣指可以測定96個樣品,如果每個樣品重複測定3次,那麽隻能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或者對照管。注意由于瓶璧和移液器吸附等,通常要比理論測定次數少1~3次。其它規格的含義依次類推。值得特别注意的是,100管/48樣中由于每個樣品測定都需要做對照,因此能夠測定樣品的數量僅爲16個(假設做3次重複)。如何防止試劑盒失效?    不要過早訂購,以免試劑盒失效.收到試劑盒後,檢查外包裝是否正常。馬上打開,按照試劑盒說明書核對試劑數量是否正确,注意瓶中試劑狀态是否與說明書一緻。如果有問題,或者懷疑,馬上聯系公司銷售,進行确認。如果沒有問題,請務必按照說明書進行試劑的保存。注意,不同試劑,可能需要分别保存在常溫(25°℃)、4℃和-20℃,務必分别按照要求保存,不要整個試劑盒放置于冰箱。如何進行預測定?(1)務必在7個工作日内進行預測定,以确定該試劑盒是否适合您的樣品,以免造成試劑盒和樣品的浪費。(2)選擇2~3個預期差異比較大的樣品,嚴格按照說明書進行操作,注意儀器工作狀态,操作規範,控制好測定條件,尤其是溫度。(3)如實與公司銷售溝通預測定結果,公司技術人員會确認測定結果是否正常,是否需要調整,如何進行調整,從而确保您的測定結果可靠。比色皿有哪些規格?(1)常量比色皿,如1mL和3mL等,常量法試劑盒都是選用1mL體系,隻能用1mL比色皿,不可以用更大體積的比色皿,否則試劑量不夠,無法正常比色。(2)微量比色皿,如0.25mL和0.5mL等,微量法試劑盒都是選用0.25mL比色皿。一般客戶都選擇使用标儀(需要自備酶标闆)(3)紫外波長檢測需要石英比色皿,不可以用普通玻璃比色皿。(4)不同規格的比色皿,其外觀大小是一緻的,都是1cm光徑(也有0.5cm光徑的比色皿,不常見,也可以用,但是計算時要注意修改計算公式),其内容積差異在于壁的厚度。代測的優點(1)更加省事兒,完全不必爲測定犯難。用戶隻要提供樣品和想測定的指标,就不再需要爲測定操心了,不再受到操作技能、儀器設備和時間的限制,就等着拿到數據寫論文。(2)測定數據更有保障。嚴格的測定質量管理體系,從而保證了測定結果的真實可靠。我們還建立了免費預測定制度。(3)防止樣品損失無論是用戶自己完成測定全過程,還是購買試劑盒完成測定,都可能因爲缺乏測定經驗,導緻測定失敗,從而損失樣品的情況。對于生命科學研究而言,樣品是＊珍貴的。樣品一旦損失,輕則造成研究進度被耽擱,重則造成研究完全失敗!代測能夠充分保證測定成功,從而防止了樣品損失。當然,樣品質量是測定成功的前提,而且樣品質量隻有用戶自己才能控制和保證。生化檢測試劑盒的基本原理  生化檢測試劑盒,又稱生化試劑盒,是利用特定的生物成分、動力學及化學反應等技術制備的試劑盒,用于檢測生理學、病理學、藥理學等領域中特定的生物分子或化學物質。生化檢測試劑盒包括底物、酶試劑盒、探針等多個組成部分,其中＊常用的是底物-酶法。底物-酶法是生化檢測試劑盒檢測的基本原理。在該過程中,底物與酶在細胞膜上結合形成基質酶,進而形成底物-酶複合物。随着時間的推移,底物-酶複合物逐漸分解,釋放出分子小的底物和分子大的未完全消化的底物。未完全消化的底物可以被一系列的酶代謝,同時底物、酶和代謝産物都會對複合物的穩定性産生影響,從而影響檢測試劑盒的檢測結果。生化試劑盒可以檢測的樣本類型有哪些?   生化試劑盒的實驗原理是基于化學反應,理論上是不受生物種屬及樣本類型的限制。生化試劑盒樣本檢測通常隻分樣本類型,不分種屬。但是某些指标在不同種屬或類型樣本中的提取方式不同。因此,具體情況請參見說明書或與技術支持聯系确認。生化試劑盒樣本檢測的一般要求:1)于生化檢測而言,樣本＊-好無溶血、脂血、黃-疸的現象。組織樣本需将血液洗淨擦幹後再進行稱重處理。2)樣本處理後＊-好盡快進行檢測,且保存于冰盒之上,待測。3)樣本需澄清,若不澄清,需離心後取上清進行檢測(特殊指标除外)。4)樣本值應在試劑盒線性範圍内,若超過線性範圍,需稀釋後再進行檢測,若低于檢測範圍,需增加樣本濃度後進行檢測。氧化型/脫氫抗壞血酸（DHA）含量測試盒本品用于科研實驗,不用于臨床。測定意義:輔酶NAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的 NADH 經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成 ATP 的同時,形成大量的 ROS,同時 NADH 再生爲 NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和 NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和 TCA 循環的強弱。較高的NAD(H)及 NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和 TCA 循環。另外,NAD+降解産物對細胞信号傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。測定原理:分别用酸性和堿性提取液提取樣品中 NAD+和 NADH,NADH 通過 PMS 的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)爲甲瓒,在 570nm 下檢測吸光值;而 NAD+可被乙醇脫氫酶還原爲 NADH,進一步采用 MTT 還原法檢測。需自備的儀器和用品:酶标儀、台式離心機、移液器、96 孔闆、研缽、冰和蒸餾水。試劑的組成和配制:酸性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;堿性提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;試劑二:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑四:粉劑×1 瓶,4 ℃保存,用時加入 3mL 蒸餾水,混勻,用不完的試劑 4℃保存一周;試劑五:液體 3.6mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑六:液體 30mL×1 瓶,4 ℃保存;試劑七:液體 50mL×1 瓶,4 ℃保存。NAD+和 NADH 的提取:1 血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照血清(漿)體積(mL):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL 血清(漿),加入 1mL 酸性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照血清(漿)體積(mL):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1mL血清(漿),加入 1mL 堿性提取液),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。2 組織中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:按照組織質量(g):酸性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:按照組織質量(g):堿性提取液體積(mL)爲 1:5~10 的比例(建議取約 0.1g 組織,加入 1mL堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心 10min,取上清,置冰上待測。3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):酸性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。NADH 的提取:先收集細胞或細菌到離心管内,棄上清,按照細菌或細胞數量(104 個):堿性提取液體積(mL)爲 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液),超聲波破碎(冰浴,功率20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重複 30 次),95℃水浴 5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻後,10000g 4 ℃離心 10min;取 500μL 上清液,加入 500μL 酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。充分混勻,靜置 5min 後,20000g,25℃離心 5min,棄上清,沉澱中加入:混勻,取 200μL 轉移至微量石英比色皿或 96 孔闆中,570nm 下讀取對照吸光值 A1 和測定管吸光值 A2,計算△A=A2-A1。注意事項:1、如果一次性測定樣本數較多,可将試劑一、二、三和四按比例配成混合液。2、對照管和測定管的測定步驟的區别:對照管加完試劑一、二、三、四和五後必須馬上加試劑六;測定管加完試劑一、二、三、四和五後必須反應 20min 後再加試劑六。3、反應過程中注意避光。4、若 NAD+測定中△A(A2-A1)≤0.0302,NADH 測定中△A(A2-A1)≤0.0222,說明樣本中輔酶含量較低,已低于檢測限,可做如下調整:(1)将測定管避光靜置時間 20min 延長到 60min;(2)在提取階段增加取樣量,即取 0.2g 樣本或 0.2mL 樣本加入 1mL 提取液。5、由于每一個測定管需要設一個對照管,本試劑盒 100 管保證測 48 個 NAD+或 NADH.NAD+和 NADH 含量的計算:(一) NAD+含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1475x + 0.0302,R2 = 0.9978;其中 y 爲△A,x 爲 NAD+濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NAD+含量計算NAD+含量(nmol/mL)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1) ]÷(V3×V1÷V2)=135.6×(△A -0.0302)2、組織、細菌或細胞中 NAD+含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NAD+(nmol/mg prot)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(V1×Cpr)= 6.8×(△A -0.0302)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NAD+(nmol/g 鮮重)= [(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(W×V1÷V2)= 13.6×(△A -0.0302)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NAD+(nmol/104 cell)=[(△A -0.0302)÷0.1475×V1)]÷(500×V1÷V2)=0.027×(△A -0.0302)(二)NADH 含量的計算标準條件下的回歸曲線爲 y = 0.1404x + 0.0222,R2 = 0.9976;其中 y 爲△A,x 爲 NADH 濃度 nmol/mL1、血清(漿)中 NADH 含量計算NADH 含量(nmol/mL)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V3×V1÷V2)= 142.5×(△A -0.0222)2、組織、細菌或細胞中 NADH 含量計算(1)按樣本蛋白濃度計算NADH (nmol/mg prot)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(V1×Cpr)= 7.1×(△A -0.0222)÷Cpr(2)按樣本鮮重計算NADH (nmol/g 鮮重)=[(△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(W×V1÷V2)= 14.2×(△A -0.0222)÷W(3)按細菌或細胞密度計算NADH (nmol/104 cell)= [ (△A -0.0222)÷0.1404×V1) ]÷(500×V1÷V2)=0.028×(△A -0.0222)V1:加入反應體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,2mL;V3:加入血清(漿)體積:0.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL; W:樣本質量,g;500:細胞或細菌總數,500 萬。注 意: 檢測限爲 0.1nmol/mL 或 0.1nmol/g 鮮重 或 0.001nmol/mg prot